Группы крови современные методы определения

Методы определения группы крови

Каждому человеку полезно запомнить свою группу крови. Это может неожиданно пригодиться при чрезвычайных ситуациях. Не зря у военнослужащих отмечается группа крови на гимнастерке или жетонах.

Оглавление:

Проблемы с тем, как определить группу крови, не существует. В крупных лечебных учреждениях этим занимаются лаборатории. Но даже в небольших сельских амбулаториях имеются стандартные наборы для определения группы, а провести анализ умеют все врачи и средние медицинские работники. Самостоятельно делать это ни к чему, когда есть специалисты.

Какая группа крови у ребенка можно предположить по родителям. Например, зная, что у родителей вторая, третья или четвертая, не стоит надеяться, что у ребенка будет первая.

Советы для домашнего определения

Подобные советы дают люди, которые «живут» в интернете и собирают любую информацию без разбора. Порой переиначивают ее на свой лад.

Действительно, имеется теория питания в зависимости от типа крови и проведены попытки связать с ней характер личности. Но это разрабатывалось для подбора наиболее подходящего рациона, предотвращения болезней. О связи типа личности с номером крови даже психологи перестали говорить.

Тем более, нельзя судить по любимым блюдам или наклонности к лидерству о своей группе.

В домашних условиях что-либо узнать лучше из полноценных статей, консультаций специалистов. Возможно, имеются медицинские документы (амбулаторная карта, выписки из стационара), в которых есть сведения о вашей крови.

По желанию доноров и пациентов стационаров в паспорт можно проставить печать с указанием этих сведений.

Подобные нашивки применяются на армейской форме

Кто придумал группы крови

Первооткрывателем четырех групп крови является австрийский ученый и врач К. Ландштейнер, получивший за это Нобелевскую премию по медицине в 1930 году. Открытие позволило предотвратить смертельные исходы по причине переливания, изучать предварительно совместимость донорских признаков и реципиента.

Суть предложенной системы АВ0 заключается в наличии у человека и животных антигенных структур на эритроцитах. Типовых антител (гаммаглобулинов) к ним в плазме не имеется. Поэтому реакцию «антиген + антитело» можно использовать для определения.

Распространенность групп крови по национальному признаку

Склеивание эритроцитов происходит во время встречи антигена со своим антителом. Такая реакция называется гемагглютинацией. Она видна при проведении анализа в виде мелких хлопьев. Определение группы крови основывается на получении картины агглютинации с типовыми сыворотками.

Антигены эритроцитов типа «А» связываются с антителами «ά», соответственно «В» с «β». По составу крови выделены:

  • I, или 0 (ά, β) — на поверхности эритроцитов совсем нет антигенов;
  • II, или А (β) — содержат антиген А с антителом β;
  • III, или В (ά) — имеется антиген типа В с антителом ά;
  • IV, или АВ(00) — имеет оба антигена, но не содержит антител.

Антигены имеются у зародыша человека уже в эмбриональном периоде, а антитела (агглютинины) появляются в сыворотке новорожденных в течение первого месяца жизни.

Стандартное определение группы крови (простой метод)

Для проведения анализа на группу крови нужны эритроциты пациента (берутся из капли крови) и стандартные сыворотки, содержащие известные антигены.

На плоской тарелке двумя рядами помещают по крупной капле четырех сывороток (достаточно только III и II, но для контроля берется еще 1 и 1V). Разными стеклянными палочками (удобно пользоваться глазными пипетками) в капли сывороток вносят исследуемую кровь (соотношение должно получиться примерно 1:10) и осторожно помешивают.

Пять минут тарелку покачивают, давая возможность сывороткам хорошо перемешаться с кровью.

Расшифровка результатов

Проходит 5 минут, и можно оценивать результаты анализа. В больших каплях сыворотки наступает просветление, в одних образуются мелкие хлопья (реакция агглютинации), в других их нет. Здесь возможны варианты:

  • если агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками III и II групп (+ контрольные 1 и 1V) — это первая группа;
  • если свертывание отмечается во всех, кроме II — это указывает на вторую группу;
  • при отсутствии агглютинации только с III сывороткой — устанавливается третья группа крови;
  • если свертываемость отмечается во всех пробах, включая 1V-контрольную — группа четвертая.

Когда сыворотки расположены в правильном порядке, на тарелке проставлены подписи, то ориентироваться легко: где нет агглютинации, такая и группа.

Бывают случаи, когда склеивание видно неясно. Тогда анализ переделывают, мелкую агглютинацию смотрят под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Для уточнения группы при невыраженной агглютинации применяют метод двойной перекрестной реакции со стандартными эритроцитами. В данном случае известными являются не сыворотки, как в простом методе, а эритроциты. У пациента кровь набирают в пробирку, центрифугируют и для исследования пипеткой откачивают сверху сыворотку.

На плоскую белую тарелку капают 2 большие капли сыворотки от пациента. В них добавляются стандартные эритроциты А (II) и В (III) групп крови. Постепенно размешивают, покачивают тарелку.

Результат оценивается через 5 минут:

  • если агглютинация наступила в обеих каплях, группа первая;
  • если нет ни в одной пробе, группа четвертая;
  • если в одной из примененных известных эритроцитов, то группа определяется по наличию или отсутствию свертываемости в капле.

Определение группы цоликлонами

Цоликлоны — это синтетические заменители сывороток. Они содержат искусственные заменители агглютининов ά и β. Их называют эритротестами «Цоликлон анти-А» (розового цвета) и «анти-В» (синего). Ожидаемая агглютинация происходит между эритроцитами исследуемой крови и агглютининами цоликлонов.

Методика не требует использования двух серий, считается более точной и надежной. Проведение и оценка результатов такие же, как в простом стандартном методе.

Особенность: четвертая группа АВ(IV) обязательно подтверждается реакцией агглютинации со специфическим цоликлоном «анти-АВ» и отсутствием неспецифического склеивания эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Метод позволяет определить группу и резус фактор в лаборатории и полевых условиях. В состав набора входит карточка с лунками. На дно лунок уже нанесены высушенные реагенты. Здесь, кроме «анти-А», «анти-В» и «анти-АВ» используется «анти-D», который дает результат резус-фактора.

Можно использовать кровь в любом виде, подойдет соединение с консервантом и взятая из пальца.

Перед исследованием на карточке записывается фамилия пациента, в каждую лунку вносится капля воды для растворения ингредиентов. Затем отдельными палочками в лунки с реактивами добавляют кровь и слегка перемешивают. Окончательный результат «читают» спустя три минуты.

Группа крови всегда перепроверяется при необходимости переливания. Одновременно контролируют групповую и индивидуальную совместимость. Ведь, на самом деле, в крови человека обнаружено гораздо больше антигенных свойств, чем в системе АВ0. Просто они у большинства населения слабо проявляются.

Но у пациента с тяжелыми заболеваниями, изменяющими свойства крови и аллергизирующими организм, они становятся определяющими, требуют считаться с наличием и уровнем в крови. Поэтому знание пациентом собственной группы добавляет уверенности в результате исследования.

Источник: http://serdec.ru/krov/metody-opredeleniya-gruppy-krovi

Определение группы крови у взрослых и детей: методы

«Люди голубой крови», «королевская кровь», «кровный брат» – существует много выражений, которые затрагивают одну из важнейших систем в организме человека. Она отвечает за тканевое питание, дыхание, обмен веществ, всасывание и усваивание питательных веществ. Роль кровеносной системы сложно переоценить. Здесь нет мелочей. Так, групповая принадлежность и резус-фактор играют большую роль в жизни человека. Особенно это важно для женщины. Определение группы, биохимический и другие анализы предваряют любое вмешательство в организм пациента. Лечение практически каждого заболевания начинается с взятия биологического материала для исследования.

Интересные факты о группе крови

В Японии считают, что характер человека полностью зависит от того, какая у него групповая принадлежность крови. У обладателей первой группы преобладают такие качества, как самоуверенность и решительность. Люди со второй группой крови надежны, но замкнуты в себе. Те, кто обладают третьей, чаще всего честолюбивы и умны. У требовательных, уравновешенных людей течет в жилах кровь четвертой группы. По этому принципу многие создают семьи, заводят друзей, работодатели подыскивают себе сотрудников.

На Австралийском континенте живет удивительный человек Джеймс Харрисон. За свои 74 года он успел сдать кровь около 1000 раз! Медики утверждают, что как минимум 2 млн новорожденных детишек сумел спасти этот необычный донор. Он обладает не только самой редкой группой, но и может похвастаться наличием особых антител, которые помогают младенцам с тяжелой анемией успешно бороться с недугом.

Система АВО

В мире существует 4 группы крови, имеющих свои особенности. Первая группа не содержит белков антигенов А и В, поэтому она является универсальной в качестве донорской. Но человеку, имеющую такую группу крови, нельзя переливать никакую другую, кроме первой. Вторая группа носит антигены А. Она совместима с первой и второй. Третья группа крови имеет в своем составе антигены В. И к ней идеально подходит первая или третья. Четвертая группа содержит антигены А и В, и она совместима с кровью любой группы. В настоящее время врачи стараются осуществлять переливание реципиенту той же группы, что и его собственная.

Это общепринятая система, в которой работают все медицинские учреждения мира. Определение группы крови и резус-фактора проводят всем новорожденным детям, людям перед любым оперативным вмешательством, переливанием крови и ее компонентов. Особенно за этими показателями у женщин во время беременности наблюдают акушеры-гинекологи.

Методы определения группы крови

Существует несколько способов определения групповой принадлежности крови человека в лабораторных и даже домашних условиях:

  1. По стандартным сывороткам.
  2. По стандартным эритроцитам.
  3. С применением цоликлонов.
  4. По группе крови родителей.

Важно отметить, что определение группы крови и резус-фактора последним способом не является достоверным. Этот метод можно назвать «домашним». Он подходит в качестве развлечения подросшим детишкам, для лучшего понимания того, как же происходит наследование подобных признаков ребенком.

Как определить группу крови, используя цоликлоны

Применение цоликлонов – это простой и современный способ определения группы крови человека и ее резус-фактора. Препарат получают из биологического материала мышей и повсеместно используют в системе АВО. Плюсы цоликлонов в том, что они быстрее агглютинируются, то есть сворачиваются, с кровью и реакция становится более выраженной. Чаще всего лаборанты используют реагенты анти-А и анти-В, однако в некоторых случаях работают и с анти-АВ и анти-О. Определение группы крови с помощью цоликлонов требует меньше времени и подготовки.

На специальном планшете делают две надписи соответственно названиям используемых цоликлонов. Под ними наносят небольшую каплю исследуемой крови, рядом — немного реагента. Стеклянной или любой другой чистой палочкой перемешивают обе жидкости, затем в течение двух минут медленно покачивают планшет для лучшего соединения и сворачивания белков. По реакции агглютинации судят о результатах. Полное отсутствие склеивания говорит о том, что исследуемая кровь принадлежит к первой группе. Склеивание с цоликлоном анти-А доказывает, что она относится к второй группе. Если наблюдается реакция с реагентом анти-В, значит, у пациента кровь третьей группы. При агглютинации с обоими цоликлонами ясно, что исследуемый материал содержит антигены А и В. Следовательно, является кровью четвертой группы.

Определение группы крови и резус-фактора с помощью цоликлонов является наиболее удобным и распространенным в настоящее время. Для того чтобы узнать резусную принадлежность, нужно на планшет нанести несколько капель цоликлона анти-D-супер и одну — исследуемой биологической жидкости. Далее нужно их смешать. Наличие реакции свертывания говорит о том, что пациент имеет положительный резус-фактор. Соответственно, отсутствие агглютинации означает то, что резус отрицательный.

Определение группы крови стандартными сыворотками

В этом случае используют стандартные сыворотки четырех известных групп. Каждого реагента берут по две серии, чтобы обеспечить наиболее точный результат. Для облегчения работы сыворотки окрашены каждая в свой цвет: О(I) – бесцветная, А(II) – синяя, В(III) – красная, АВ(IV) – желтая. На специальный планшет наносят сыворотки первых трех групп по две серии каждой. Рядом капают по одной капле исследуемой крови, взятой из пальца. Планшет аккуратно покачивают до полного перемешивания и по реакции агглютинации судят о результатах. Определение группы крови — это всегда скрупулезная манипуляция, которая требует внимательности и сосредоточения.

Стандартные эритроциты для определения группы крови

Определение группы крови стандартными эритроцитами – это еще один высокоточный метод выявления групповой принадлежности. Его проводят с использованием стандартных эритроцитов, полученных из материала донора. Сыворотку центрифугированной крови наносят на планшет в два ряда по три капли в каждом. Возле каждой из них помещают немного эритроцитарной массы в следующем порядке: О(I), А(II), В(III) — по две серии. Так же как и при определении группы другими методами, в этом случае тщательно перемешивают капли крови и реагенты и судят о результатах по свертыванию белка.

Определение групповой принадлежности ребенка по крови родителей

Определение группы крови по родителям – это, пожалуй, единственный «домашний» метод. Согласно закону наследования ребенок берет от отца и матери по одному антигену. В таблице ниже представлены все возможные варианты наследования ребенком группы крови.

Источник: http://www.syl.ru/article/160079/new_opredelenie-gruppyi-krovi-u-vzroslyih-i-detey-metodyi

Методы определения групп крови

Группа крови – это оригинальные антигенные характеристики клеток крови (эритроцитов), которые определяются с использованием способов распознания групп белков и углеводов, содержащихся в оболочке эритроцитов. Определить группу крови – обязанность каждого человека, для этого необходимо сдать анализ. На сегодняшний день в любой больнице или поликлинике можно сдавать свою кровь на исследование, поэтому трудностей с проведением данной процедуры не возникает, и каждому важно знать, как определить группу крови и откуда берут материал на исследование.

Какая кровь бывает у людей?

Группа крови в течение всей жизни у каждого человека остается неизменной. Люди с одним типом могут отличаться от людей с другим по причине того, что у каждого человека разное количество агглютиногенов A и B в кровяных клетках, а также совсем разное количество агглютининов α и β, которые содержатся уже в амбоцептере крови.

В природе существует несколько видов групп крови:

  • 0(I) – эта содержит только агглютинины α и β, агглютиногенов нет.
  • A(II) – содержится только агглютинин β и агглютиноген A.
  • В(III) – агглютинин α и агглютиноген B.
  • AB(IV) группа крови — содержит агглютиногены A и B, агглютинины отсутствуют.

Откуда появилась классификация? Впервые открыл все существующие типы крови у людей врач из Австрии. Это открытие позволило ученому получить премию А.Нобеля по медицине в 1930 году. Также открытие групп помогло остановить смертельные исходы в процессе переливания крови от одного человека другому. Человек, которому необходимо сделать переливание называется реципиентом. Человек же, что сдает свою кровь, называется донором. Наиболее подходящим типом для реципиента будет кровь идентичная его типу.

Помимо существующих антиглютиногенов A и B в кровяных клетках можно наблюдать и другие антигены, например, резус-факторы. В ситуации, если кровь не совместима по резус-фактору, то проводить переливание категорически запрещено. Впоследствии могут возникнуть плачевные случаи, вплоть до летального исхода.

Проведение исследования

Как узнать группу крови, откуда ее берут для исследования? Эти вопросы интересуют всех заинтересованных людей. Для этого можно обратиться в лечебное учреждение, где нужно сдать биологическую жидкость из пальца. Анализ на группу крови можно проводить тремя основными способами:

  • по изогемагглютиновым сывороткам;
  • по изогемагглютиновым сывороткам и стандар­тным клеткам крови (перекрёстный способ);
  • метод с применением МКА (цоликлоны анти-A и анти-B).

Обычно в лабораториях переливания крови проводят исследование по первому способу, т.е. с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток. Процесс заключается в том, что тест проводится на обнаружение антиглютиногенов A и B в освещенной лаборатории с температурой воздуха в пределах°C. Для этого берут исследуемый материал и на специально подготовленную тарелку или пластину наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворот­ки I, II, III групп в объеме 0,1 мл.

Чтобы избежать возникновения каких-либо неточностей, наносят две серии сывороток каждого из типов. Должно получиться 6 капель. Эти 6 ка­пелек образца анализируемой биожидкости переносят на специальную пластину в другие 6 точек, при этом каждую каплю размещают рядом с капельками сыворотки (крови понадобится в 10 раз меньше, чем используемое количество сыворотки), после этого их аккуратно смешивают уже другими палочками со слегка закругленными краями. Во время смешивания пластину аккуратно покачивают из стороны в сторону. Склеивание клеток происходит в течение 30 секунд. В те капли биологической жидкости, где прошло соединение, добавляется немного изотонного раствора хлорида натрия, и оценивается результат теста.

Вторым тестом на группу является перекрёстный метод. Его чаще применяют в серологических лабораториях. Перекрестный метод заключается в том, что сдавать биологический материал нужно на определение содержания антиглютиногенов A и B с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток и антител α и β при помощи эритроцитов. Для этого на специальную тарелку белого цвета наносят маркером 6 клеток, в которые капают пипеткой по 1 капле сыворотки из анализируемой биожидкости, а рядом располагают по маленькой капле эритроцитов определенных групп 0(I), A(II), B(III) – по два раза.

Отличительной и главной особенностью этого метода является то, что эритроциты группы 0(I) главные, т.к. они не содержат антигенов. Эта особенность делает невозможным соединение эритроцитов с любой из сывороток.

В третьем тесте на выявление применяют МКА. Используется гибридомная биотехнология. Гибридома представляет собой гибрид клеток, полученных из миеломы и иммунного лимфоцита, что производит МКА. К моноклональным антителам (МКА) относят: цоликлоны анти-A и цоликлоны анти-B. Их наносят на приготовленную пластину белого цвета по 1 большой капле под специальными надписями анти-A и анти-B. После, рядом с каплями антител размещают по маленькой капле анализируемой биожидкости. Агглютинация происходит в последующие 2–3 минуты.

Погрешности при проведении исследования

Определение группы крови описанными тестами может осложниться появлением некоторых характерных ошибок. Все возможные ошибки можно классифицировать на три группы: технические, биологические и сывороточные.

К техническим ошибкам относятся поспешная оценка результатов, несоблюдение режима нужной температуры, отсутствие маркировки платин, неверное соотношение количества крови и сыворотки. Биологические ошибки появляются в тех случаях, когда красные кровяные тельца соединились со всеми сыворотками, на исследование берут инфицированную биожидкость, происходит полная панагглютинация, неактивные антигены A и B. Сывороточные ошибки могут быть, если берут инфицированную, просроченную или сыворотку с титром ниже 32.

Во избежание указанных погрешностей нужно соблюдать строгие правила при проведении тестов на установление своей группы. Следует использовать разные тарелки (чистые и сухие), категорически нельзя смешивать компоненты одной и той же палочкой, следить за сроками и температурой, ну и конечно, процедура определения группы крови не должна проходить в домашних условиях, а только в медицинском учреждении специалистами.

Таким образом, только исследования в лабораторных условиях помогут ответить на главный вопрос, как узнать группу крови. И никакая иная информация или советы других людей не позволят узнать свою группу, особенно в домашних условиях. Поэтому для тех, кто задается вопросом, какая у меня группа крови, для проведения правильного исследования с точными результатами необходимо специальное оборудованное помещение, где будут соблюдаться все требования, а не домашние условия с использованием подручных предметов.

Источник: http://okrovi.ru/gruppy-krovi/opredenie-grupp-krovi.html

Способы определения группы крови

Групповую принадлежность крови по системе АВО определяют с помощью реакции агглютинации. Используют три способа определения групп крови по системе АВО:

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перекрёстный способ);

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови) врач стационара определяет группу крови сам (в лаборатории перепроверку выполняют, но постфактум).

1. Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток

Суть метода в обнаружении в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используют реакцию агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15—25С.

Методика проведения реакции

1. Перед началом реакции подписывают тарелку (наносят фамилию и инициалы исследуемого), после чего на неё под соответствующие обозначения наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп в объёме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать чёткой агглютинации. Всего получается шесть капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0(1), А(11), B(III).

2. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку (0,01 мл, маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в шесть точек, каждую — рядом с каплей стандартной сыворотки (количество исследуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой её смешивают), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закруглёнными краями перемешивают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10—30 с, наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(2).

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10— 30 с в смеси появляются видимые невооружённым взглядом мелкие красные зёрнышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зёрнышки постепенно сливаются в более крупные зёрна, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.

Определение резус-фактораАнтигенная система резус-фактора

В 1940 г К. Ландштейнер и А. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а у 15% отсутствует.

Система антигенов резус представлена пятью основными антигенами: D, С, с, Е, е (ранее считали, что их шесть, но позже было доказано, что аллельного гена d не существует). С и с, а также Е и е — аллельные антигены. Каждая из хромосом несёт только три гена из пяти: D, С или с, Е или е.

Наиболее активен из всех антигенов Rh0 (D) — резус-фактор. В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh+) и резус-отрицательную (Rh-).

Способы определения резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делят на способы, применяемые в клинической практике, и лабораторные способы.

Способы определения Rho(D) в клинической практике

Методика проведения реакции. Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы AB(IV), разведённую 33% раствором декстрана затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступаетв течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и чёткой агглютинации наблюдать не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл физиологического раствора и перемешивают путём однодвукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови

подвергаются агглютинации только эритроциты переливаемой донорской крови, так как агглютинины вливаемой крови разводятся в сосудистом русле пациента, их титр становится низким и они не в состоянии агглютинировать эритроциты реципиента. По правилу Оттенберга, можно переливать кровь, эритроциты которой не могут быть агглютинированы сывороткой реципиента.

Правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0,5 л донорской крови (!).

Источник: http://megaobuchalka.ru/10/19270.html

Методики определения групп крови, описание таблицы

Практически каждый человек хотя бы единожды за свою жизнь проходил тест для установления принадлежности группы крови. О методах проведения данного анализа и об их достоверности пойдет речь далее.

Для чего проводится диагностика?

Группа крови – это определенный ряд антигенов, размещенных на поверхности эритроцитов, которые и определяют их специфичность. Таких антигенов известно очень много, поэтому принято единую классификацию крови по АВО и резус-фактору.

Этот показатель в обязательном порядке определяется у пациентов перед хирургической операцией, военным, полицейским и другим категориям людей, которые могут потребовать срочного переливания крови.

Стандартная методика определения группы крови

Самый распространенный метод исследования данного показателя – это способ с применением стандартной сыворотки. Эта диагностика определяет общепринятые антигены по системе АВО.

Изогеммагглютинирующая сыворотка представляет собой совокупность специальных антител к наружным частичкам эритроцитов. Если находится совместимый антиген, на который могут воздействовать антитела, то формируется комплекс, способствующий началу иммунно-защитного механизма. Вследствие этого происходит склеивание эритроцитарных клеток крови (агглютинация). Если подобное происходит, то делается вывод о несовместимости крови.

Данные сыворотки изготавливаются из крови доноров по специальной системе, подразумевающая под собой извлечение плазмы, в которой и содержать антитела, после чего ее разводят изотоником – хлорид натрия, это проходит в несколько этапов:

  • В емкость наливают 1 мл воды, в которой растворено 0,9% обычной соли.
  • В эту же пробирку вносят такое же количество разведенной плазмы.
  • Затем 1 мл данной жидкости вносят в емкость с изотоником.

Процесс позволяет получить соотношение 1:256. Если методика разведения будет нарушена, то есть большая вероятность получения ошибочных результатов.

Проведение исследования

На поверхность планшета наносится 0,1 мл каждой сыворотки в район, где нанесена нужная пометка. За тем берется исследуемая кровь объемом 0,01 мл для каждого образца. И затем проводится смешивание каждой капли сыворотки с кровью.

Спустя пять минут проводят диагностику. Тестирование считается положительным, если прошла реакция агглютинации. Исходя из результатов анализов, выполняется построение таблицы, в которую они и заносятся.

Таблица результатов теста на группу крови с применением стандартных сывороток.

Методика перекрестных реакций

В этом случае, чтобы определить агглютиноген используют цоликлоны. Иначе стандартные сыворотки с технологией параллельного выяснения благодаря эталонным эритроцитарным клеткам.

Два этих способа весьма сходны между собой. Но различия все, же есть.

На поверхность, на которую предварительно помещаются различные сыворотки, наносят по небольшой капле обычных эритроцитов. Затем кровь разделяют на фракции при помощи центрифуги. И форменные элементы добавляют к стандартным сывороткам, а плазменную часть – к стандартным эритроцитарным клеткам. Оценивание результатов проводят через пять минут и показатели отмечают в таблице.

Благодаря данной методике исключаются ошибки при исследовании.

Метод с использованием цоликлонов

Если нет возможности определить группу крови стандартными сыворотками, то используют данную методику.

Цоликлоны – гибридные антитела, которые получают из в-лимфоцитов крови мышей.

Последовательность проведения диагностики такая:

  1. После нанесения отметок на планшет, которые соответствуют виду цоликлона, наносится раствор.
  2. К каждому образцу цоликлона вносят одну каплю диагностированной крови.
  3. Оценка результатов через пять минут.
  4. Для данной методики необходимо соблюдать специальные условия. Они включают в себя пригодность цоликлонов, температуру в помещении и уровень влажности.

Результаты анализов считаются позитивными в том случае, когда при смешивании данных фракций наблюдается реакция агглютинации. Если подобное произошло в двух образцах, то считается, что кровь относится к четвертой группе. Если реакция не наблюдается вовсе, то к первой. Диагностические ошибки в данной методике встречаются не часто.

Быстрый способ «Эритротест»

Выше перечисленные способы используются в медицине уже долгое время и распространены по всему миру. Но ввиду того, что отрасль постоянно развивается, вводятся быстрые диагностические методы по установлению принадлежности к группе крови. Таким нововведением считается и «Эритротест».

Чтобы определить показатель данным способом необходимо иметь следующее оборудование:

  • Стандартный планшет с пятью лунками
  • Скарификатор для прокола и получения биологической жидкости
  • Стеклянная пипетка с резиновой грушей
  • Пипетка для забора реактивов
  • Палочки для смешивания компонентов

Основное преимущество эритротеста состоит в том, что исследование не требует дополнительных условий и доступно в тот момент, когда проведение стандартной диагностики невозможно.

В углублениях планшета размещают цоликлоны к антигенам поверхностного типа и основному, который отвечает за наследственную передачу резус-фактора. В последнюю лунку добавляют контрольную сыворотку, которая исключит ошибочный результат и верно укажет на принадлежность к той или иной группе.

Оценивание результатов анализа проводится с помощью таблицы, в ней указываются возможные результаты тестирования.

Классификация по системе АВО

Группа крови, определение ее проводится исходя из специально разработанных норм. Существует определенная таблица, которая характеризует каждую группу крови.

Источник: http://sosudask.ru/gruppa-krovi-opredelenie/

Методика определения групп крови

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО осуществляется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время применяется три способа определения групп крови по системе АВО:

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стан­дартным эритроцитам (перекрестный способ),

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки, используемые для определения группы крови, соответствуют четырем группам крови 0 (І), А (II), В (III), АВ (IV). Их получают из крови, реже из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Используется кровь от доноров, трупная или плацентарная кровь. Кровь отстаивается и забирается сыворотка, к которой добавляется консервант (борная ки­слота из расчета 3,0 г порошка на 100 мл сыворотки). После отстаива­ния сыворотка разливается по стерильным ампулам или флаконам, ко­торые сразу же запаиваются или герметично закупориваются.

Требования, предъявляемые к стандартным изогемагглютини­рующим сывороткам:

1. агглютинация с соответствующими эритроцитами должна появиться в течениес. а через 2 мин. она должна быть четкой;

2. не давать агглютинацию с эритроцитами одноименной и пер­вой групп:

3. титр сыворотки должен быть не ниже 1 : 32;

4. сыворотка должна быть без признаков микробного загрязне­ния, прозрачной;

5. каждая ампула должка иметь паспорт с обозначением груп­пы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы.

Во избежание ошибок при определении групп крови сыворотки окрашивают в определенный цвет. Окраска стандартных изогемагг­лютинирующих сывороток: 0(1)- не окрашивается, А(II) — синий цвет, В(III) — розовый, AB(IV)- желтый. Сыворотки хранят герметично за­крытыми, в темном месте, лучше в холодильнике.

Понятие о титре

Реакция агглютинации с различными сыворотками и эритроци­тами может в одних случаях наступить довольно быстро и быть четко выражена, в других она менее выражена и возникает более медленно. Иногда агглютинация и при большом разведении сыворотки четко выявляется, в других случаях даже слабое разведение приводит к не проявлению её. Все это обусловлено тем, что чувствительность эрит­роцитов и сыворотки подвержена значительным колебаниям. Под титром агглютинации понимается максимальное разведение сыворот­ки, при котором еще может наступать реакция агглютинации. При оп­ределении титра сыворотки, постоянной величиной являются стан­дартные эритроциты; при определении титра эритроцитов, постоян­ной величиной является стандартная сыворотка. Титр понятие относи­тельное, так как титр эритроцитов точно устанавливается только по отношению к испытуемой сыворотке, а титр сыворотки только к ис­пытуемым эритроцитам. К другим эритроцитам он может быть дру­гой, но колебания его обычно бывают небольшими. Однако целый ряд эритроцитов обладает одинаковой чувствительностью, также как и ряд сывороток имеет одинаковый титр. Титр зависит и от метода оп­ределения. При определении капельным методом на тарелке у здоро­вых людей титр сыворотки колеблется в пределах 1:8-1:32. Если титр определяется в пробирках, он получается значительно выше.

Практическое значение имеет тот факт, что титр агглютининов новорожденных крайне низкий, а по мере развития человека он по­вышается; достигая максимума в возрасте от 5 до 20 лет, дальше он начинает падать. Титр агглютиногенов может меняться при заболева­ниях. Повышение его отмечается при ряде воспалительных процессов, резкое снижение бывает при тяжелой общей инфекции. Слабый титр сыворотки отмечен при лейкемии. У здоровых же людей титр сыво­ротки остается почти неизменным.

Зависимость реакции агглютинации от физико-химических условий

На ход агглютинации может оказывать влияние целый ряд фи­зических и химических факторов.

Температура. При низкой температуре происходит неспецифи­ческая "холодовая агглютинация". Для неё характерно возникновение агглютинации вне зависимости от группы крови. "Холодовая агглю­тинация" обусловлена наличием в сыворотке особого холодового агг­лютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах. При температуре выше 20°С он никогда агглю­тинации не дает. Поэтому несоблюдение температурного режима при определении группы крови может привести к ошибке.

Химические Факторы. Течение агглютинации зависит от степе­ни концентрации солевого раствора, в котором находятся эритроциты. Повышение его концентрации приводит к её ослаблению, а при со­держании 4, 25 % во взвеси эритроцитов агглютинация уже не насту­пает. Ускорение агглютинации наблюдается при добавлении 10 % раствора лимоннокислого натрия.

Феномен Томсена. Агглютинация, возникающая при взаимодей­ствии одноименных агглютиногенов и агглютининов, является специ­фической. Неспецифическая агглютинация может быть обусловлена рядом факторов. Одним из видов такой агглютинации является фено­мен Томсена, описанный в 1927 г. Суть этого феномена заключается в следующем: нестерильно взятые и отмытые эритроциты, независимо от их групповой принадлежности, простояв в течение суток при ком­натной температуре, начинают давать агглютинацию с сыворотками всех групп, включая собственную. Причина возникновения феномена Томсена — бактериальное загрязнение крови. При микроскопическом исследовании такой агглютинации видно, что эритроциты лежат близко один к другому, а между ними заметны границы, чего нет при истинной агглютинации. Макроскопически агглютинацию при этом феномене нельзя отличить от истинной. Поэтому можно неправильно определить групповую принадлежность крови, все эритроциты будут трактоваться как принадлежащие к группе (AB)1V.

Панагглютинация (аутоагглютинация). Явление неспецифической агглютинации может наблюдаться и в свежей бактериально не загрязненном крови, Встречается она сравнительно редко и называет­ся панагглютинацией, или аутоагглютинацией. При этом виде агглю­тинации сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже собственной группы, а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, в том числе с сыво­роткой группы (AB)IV. Панагглютинация может возникать при целом ряде заболеваний (болезнях крови, септикопиемии, заболеваниях гепатолиенальной системы, пневмонии, нефритах и т. д.), иногда выяв­ляется и у здоровых людей. Панагглютинация возникает только при комнатной температуре, при температуре, близкой к температуре те­ла, она обычно не наступает. До настоящего времени причина этого явления неизвестна. Макроскопически панагглютинация неотличима от специфической агглютинации.

Псевдоагглютинация. Явление псевдоагглютинации обусловле­но склеиванием эритроцитов в монетные столбики независимо от их агглютинабельных свойств. При этом они не разрушаются, мембраны сохраняются, что четко видно под микроскопом. При добавлении 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия псевдоагглютинация исчезает.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ (ПРОСТОЙ МЕТОД)

В повседневной клинической практике наиболее часто применя­ется определение групп крови по стандартным изогемагглютинирую­щим сывороткам. Суть метода-с помощью стандартных изогемагглю­тинирующих сывороток определяется наличие в исследуемой крови групповых антигенов А и В.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), AB(1V) групп двух серий, изотонический раствор хлорида на­трия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пи­петки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Для определения группы крови используют блюдцеобраз­ные пластины (тарелки) с лунками, над которыми имеются обозначе­ния соответственно стандартным сывороткам.

Определение группы крови производится при температуре не ниже +15° С и не выше +25° С.

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Осмотреть стандартные гемагглютинируюшие сыворотки, чтобы они не содержали осадка, не был просрочен срок год­ности, были правильно расположены по отношению друг к другу.

3. На пластинке (тарелке) написать фамилию больного.

4. Согласно обозначениям групп крови на тарелке, в каждую лунку нанести отдельной пипеткой по одной капле стандарт­ной сыворотки — первой, второй и третьей группы двух серий образуя два ряда по три капли в каждом.

5. Взять кровь. Кровь для исследования берется из пальца или вены. При взятии крови из пальца в левую руку взять левую кисть больного, обработать спиртом дистальную фалангу IV пальца и проколоть стерильной иглой, при этом первую кап­лю крови удалить.

6. Шесть капель крови перенести стеклянной палочкой на тарелку, размещая их рядом с каплей стандартной сыворотки. Можно на тарелку нанести одну большую каплю крови, а за­тем уголком предметного стекла перенести в капли сыворот­ки. Каждый раз кровь берут новым уголком стекла. Соотно­шение исследуемой крови и стандартной сыворотки должно быть 1:10.

7. Место укола пальца обработать спиртом.

8. Каждую каплю крови и сыворотки на пластинке смешать от­дельной палочкой.

9. Пластинку осторожно покачивать в течение 5 минут, посто­янно обращая внимание на лунки, где может наступить агглютинация (склеивание эритроцитов). По мере наступления агг­лютинации, но не раньше чем через три минуты в капли на пластинке (тарелке) добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия.

10. Реакция агглютинации может быть положительной или отри­цательной.

Агглютинация наступает обычно в течение первыхсе­кунд. Визуально в капле появляются мелкие красные зернышки (агг- лютинаты), которые состоят из эритроцитов.

Результаты исследования в одной и той же группе двух серий должны совпадать.

1. Стандартные сыворотки трех групп не вызывают агглютина­ции эритроцитов во всех лунках — группа крови О (I) первая;

2. Стандартные сыворотки О (I) и В (III) группы агглютиниро­вали эритроциты в первой и третьей лунках, а не агглютинировали во второй — группа крови А (II) вторая;

3. Наличии агглютинации в первой и второй лунках и отсутствии в третьей — группа В (III) третья;

4. Стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эритроциты во всех лунках — данная кровь относится к четвертой группе AB(IV). Если исследуемая кровь оказалась AB(IV), группы проводится дополнительное контрольное исследование со стандарт­ной сывороткой AB(1V) группы. При отсутствии агглютинации иссле­дуемой крови с сывороткой AB(IV) группы данную кровь можно от­нести к четвертой группе.

Примечание: Во всех сомнительных случаях необходимо про­вести повторное исследование с гемагглютинирующими сыворотками другой серии.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ДВОЙНОЙ РЕАКЦИЕЙ (ПО СТАНДАРТНЫМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ) (перекрестный способ)

Суть метода — с помощью стандартных изогемагглютинирую­щих сывороток определяется наличие или отсутствие в исследуемой крови групповых антигенов А и В, а с помощью стандартных эритро­цитов наличие или отсутствие в плазме групповых антител аир. Стандартные эритроциты представляют собой% взвесь эритро­цитов 0(1), А(II) и В(III) групп в цитратно-физиологическом растворе. Их готовят из крови доноров с заранее известной группой крови, хра­нят при +4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), групп двух серий, стандартные эритроциты 0(1), А(II), В(III) групп, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стек­лянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, ре­зиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Взять 3-5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизато­ра. Кровь должна отстояться, или ее центрифугируют для получения сыворотки.

3. На планшет нанести по две капли стандартных сывороток группы 0(1), А(II), В(III), двух серий.

4. Соответственно каждой группе сывороток расположить по одной капле стандартных эритроцитов группы 0(1), А(II), В(III).

5. В стандартные сыворотки добавить по одной капле испытуе­мой крови, а в стандартные эритроциты — по две капли испытуемой сыворотки.

6. Капли перемешать углом предметного стекла, всякий раз из­меняя угол так, чтобы не произошло смешивание разных сывороток и разных эритроцитов.

7. Покачивая планшет в руках в течение 5 минут, следят за на­ступлением агглютинации.

При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях (со стандартными изогемагглютинирующими сыво­ротками и стандартными эритроцитами)

1. Эритроциты группы О (I) являются контрольными, агглюти­нация с ними не происходит.

2. Агглютинация со стандартными эритроцитами А и В и нет агг­лютинации в трех стандартных сыворотках двух серий — в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина а и β, а в испытуемых эритро­цитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(I).

3. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы В(III) и со стандартной сывороткой группы 0(1), В(III) — в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыворотке исследуемой крови — агглютинин β. Следовательно, кровь относится к группе А(II).

4. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы А(II) и со стандартной сывороткой группы А(II), 0(1) — в исследуемых эрит­роцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке — агглю­тинин а. Следовательно, кровь относится к группе В(III).

5. Нет агглютинации со стандартными эритроцитами и есть агглю­тинация со стандартными сыворотками — в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке исследуемой крови от­сутствуют оба агглютинина кровь относится к группе AB(IV).

Примечание. Результат перекрестного способа считается дос­товерным только в случае совпадения ответов о группе исследуемой крови и со стандартными изогемагглютинируюшими сыворотками и со стандартными эритроцитами. При несовпадении результатов обе реакции необходимо переделать.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ

Определение группы крови можно произвести с помощью мо­ноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны антн-А и антн-В. Получают моноклональные антитела с применением гибри- домной битехнологии. Гибридома — это клеточный гибрид, возник­ший в результате слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические монокло­нальные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родите­лей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухо­левой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую им­мунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами. Они предназначены для определе­ния группы крови системы АВО человека взамен стандартных изоге­магглютинирующих сывороток. Цоликлоны анти-А (красного цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100, 200 доз с растворителем, при­ложенным к каждой ампуле по 2, 5, 10, 20 мл соответственно. Лиофилизированный порошок разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анто-В.

Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изото­нический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Убедиться в пригодности цоликлонов, донорской крови.

3. На тарелке написать Ф. И. О. донора и реципиента.

4. Вскрыть ампулы с цоликлонами, растворителями, смешать все с помощью отдельных шприцев, разлить цоликлоны во флаконы с пипеткой (анти-А — красный, анти-В — синий).

5. Взять кровь реципиента и донора.

6. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или анти-В нанести по 1 капле (0,1мл) цоликлонов: в первую — цоликлон анти-А, во вторую — цоликлон анти-В.

7. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пи­петкой для каждой лунки перенести каплю крови в 10 раз меньше ка­пли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей цоликлона до гомогенного пятна.

8. Блюдце осторожно покачивать в течение 2,5 мин.

9. Оценить результат пробы без добавления изотонического раствора натрия хлорида.

При отсутствии агглютинации с двумя цоликлонаи группа крови О(I) — первая.

При наличии агглютинации с цоликлоном анти-А группа крови А(II) — вторая.

При наличии агглютинации с цоликлоном анти-В группа крови В(III) — третья.

При наличии агглютинации с двумя цоликлонамн группа крови AB(IV) — четвертая.

ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ

Ошибки при определении групповой принадлежности крови мо­гут быть обусловлены тремя видами причин:

— неполноценностью стандартных сывороток и стандартных эритроцитов;

— особенностями испытуемой крови.

— нарушение порядка расположения сывороток на планшете;

— нарушение соотношения сыворотки и эритроцитов; несоблюдение внешних условий (плохая освещенность, из­менение температуры окружающей среды) несоблюдение положенного для реакции агглютинации вре­мени применение загрязненных кровью планшетов, пипеток, предметных стекол;

— неправильная запись исследуемой крови;

Применение неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов:

слабые стандартные сыворотки с титром ниже 1:32 или ис­текшим сроком годности могут вызывать позднюю и слабую агглютинацию;

— применение негодных стандартных сывороток или эритроци­тов, нестерильно приготовленных и недостаточно законсер­вированных, ведет к возникновению неспецифической, «бак­териальной» агглютинации.

Особенности испытуемой крови

— наличие в крови слабого агглютиногена А2.

— кровь обладает свойством «панагглютинации» или «аутоагглютинацни», т. е. дает неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками и даже со своей собственной сывороткой. Для устранения панагглютинации планшет помещают в термостат при температуре 37° на 5 минут, после чего панагглютинация исчезает, а истинная остается.

ТАКТИКА ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППЫ КРОВИ

Непосредственно в отделении группа крови определяется вра­чом по стандартным изогемагглютннирующим сывороткам или с по­мощью цоликлонов, после этого в серологической лаборатории про­изводится проверка перекрестным методом. Если результаты совпа­дают, то группа крови считается определенной. В случае расхождения результатов, производятся повторные исследования.

В экстренных ситуациях можно ограничится реакцией с изоге­магглютинирующими сыворотками или цоликлонами, но при воз­можности следует использовать перекрестный метод.

Источник: http://xn--80ahc0abogjs.com/66_farmakologiya_832/metodika-opredeleniya-grupp-72931.html